番石榴叶提取物的鉴定及其抗菌作用

王芳 王力 董乐 蔡慧农
[1]泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州362000 [2]集美大学生物工程学院,福建厦门361021 [3]固体表面物理化学国家重点实验室,厦门大学化学化工学院,福建厦门361005

文章摘要:采用纸片扩散法对番石榴叶提取物进行体外抗菌试验研究，以了解其抗菌谱．结果表明番石榴叶提取物中存在有效抗菌成分，其中以乙醇提取物中白念珠菌、甲醇提取物中大肠埃希菌高度敏感．
文章主题:番石榴叶 抗菌活性 抑菌作用 提取物 纸片扩散法

文章内容：第23卷第5期2007年1月分子科学学报0.23.52007[文章编号]1一9035(2007)05—0365—03番石榴叶提取物的鉴定及其抗菌作用王芳,王力,董乐,蔡慧农(1.泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州362000;2.集美大学生物工程学院,福建厦门361021)3.固体表面物理化学国家重点实验室,厦门大学化学化工学院,福建厦门361005)[摘要]采用纸片扩散法对番石榴叶提取物进行体外抗菌试验研究,以了解其抗菌谱.结果表明番石榴叶提取物中存在有效抗菌成分,其中以乙醇提取物中白念珠菌,甲醇提取物中大肠埃希菌高度敏感.[关键词]番石榴叶;抗菌活性;抑菌作用;提取物;纸片扩散法[中图分类号]0652[学科代码]180?17[文献标识码]0引言番石榴(.干燥叶)为桃金娘科番石榴属植物,是热带常绿小乔木或灌木,原产于热带美洲,几个世纪前传人我国,现在我国福建,广东,台湾等地有广泛的种植.中医认为其性平味干涩,功用收敛止泻等,挥发油具有抗菌,抗病毒作用1],对消化系统也有解痉,增强胃肠蠕动的作用[2].现代药理研究表明,番石榴叶有抗金黄色葡萄球菌及轮状病毒的作用,浸膏有降血糖的作用.其抗轮状病毒的研究近几年在国内外都是一个热点,相关的报道也比较多,但是其抗菌作用的系统研究目前在国内外还不多3],抗菌谱也不明确,抗菌的机制还不大清楚,缺乏番石榴叶的抗菌性能及抗菌谱方面的科学数据.传统中药多为水煎剂,未经深加工提取,用药量大而药效迟缓.为此,本文对番石榴叶中酚类物质的提取,鉴定和抗菌性能进行了研究,以几种常见的致病细菌为代表,研究番石榴叶的氯仿萃取液,正丁醇萃取液,乙酸乙酯萃取液,甲醇萃取液的抗菌作用,为开发利用番石榴叶提供一定的依据.1材料番石榴叶的4种不同溶剂提取物均为自制.枯草芽胞杆菌,金黄色葡萄球菌,白念珠菌,大肠埃希菌,普通变形杆菌等5种菌株,均购自中国药品生物制品检定所.培养基为营养琼脂,血琼脂和沙堡弱氏琼脂.没食子酸,原儿茶酸,邻苯二酚,阿魏酸,山奈素,咖啡酸,绿原酸,黄酮类槲皮素二水物和卢丁三水物:色谱级,公司产品;甲醇:色谱级,公司产品;福林试剂:自行配制;没食子酸,丙酮,无水收稿日期:2007一4—27基金项目:中国博士后科学基金资助项目(2005037567),集美大学预研基金资助项目(60618),福建省青年创新基金资助项目(20063113),南京大学配位化学国家重点实验室开放课题基金资助项目(15—2)和吉林大学无机制备与合成国家重点实验室开放课题基金资助项目(2006—001).联系人简介:王芳(1969一),女,博士,副教授,主要从事细胞生物学研究.-:(..366分子科学学报第23卷乙醇,无水碳酸钠,均为分析纯.2实验方法2.1药物制备将番石榴叶鲜叶洗净,晒干,放人烘箱烘烤后粉碎,用石油醚浸泡脱脂3次,每次24,脱脂后的叶子加入适量水提取两次,提取液旋转蒸发浓缩,过滤后取上清液加入氯仿溶剂萃取,在氯仿萃取后的溶液中分别加入正丁醇,乙酸乙酯,甲醇溶剂萃取.将4种不同溶剂提取物的溶液烘干制成干粉.实验时以50乙醇稀释成不同的浓度.将每一种提取物称取1.000,加入50乙醇溶液10功,加塞置4℃冰箱浸泡过夜,取出再置80℃水浴热浸4,置冰箱备用.2.2总酚类物质的测定以没食子酸为标样,根据多酚类物质与福林试剂在一定条件下反应,生成的物质在765.下有吸收,得到的工作曲线为:一1197114-191188(为吸光度值;为总酚质量分数).总酚质量分数以没食子酸计算[5_.2.2.1酚类物质的鉴定采用反相高效液相色谱法(-):系统用-18柱(316×250,5),流动相包括溶剂:(体积分数为11甲酸),(体积分数为80甲醇);梯度为:0---5,:100,:0;5"50,:100一0%,:0%---100%;体积流量:100/;样品加入量:10/.;检测波长:300.真空干燥过的番石榴叶丙酮提取物30溶解在10甲醇和水中,超声10后,溶液经过145肛滤孔过滤(2,1)注入系统进行分析(,).标准溶液包括没食子酸,原儿茶酸,邻苯二酚,阿魏酸,山奈素,咖啡酸,绿原酸,黄酮类槲皮素二水物和卢丁三水物,均制成质量浓度为105/的甲醇溶液.2.2.2酚类物质的-鉴定从丙酮提取最佳工艺可知,番石榴叶中含有大量的酚类物质.但是根据目前的研究报道可知,植物中酚类物质的种类有上千种.槲皮素,山奈素,卢丁等是重要的具有生理活性的酚类物质,因此,利用-法,选用这8种酚类物质作为对照品,鉴定存在于番石榴叶中的酚类物质,结果见图1.2.3抑菌试验将各菌种接种于营养琼脂和沙堡弱氏琼脂斜面,培养20--24,制成菌悬液,菌液浓度在10---10,/,取0.1菌液涂布于营养保留时间/图1番石榴叶提取物的-图谱琼脂,血琼脂平板和沙堡弱氏琼脂平板,每个菌种做3个平行实验.分别将各种药物的纸片轻按于平板上,以二甲基亚矾纸片,空白纸片为阴性对照,以红霉素为阳性对照.细菌培养于37.,20-..24,白色念珠菌培养于37.,20-..24,测定抑菌圈大小,来判定各种受试菌种对药物敏感程度.抑菌圈直径大于等于15为高度敏感,10-15为中度敏感,小于10为耐药.3结果与讨论3.1番石榴叶提取物对受试菌种的抑菌效果番石榴叶提取物对枯草芽胞杆菌(1),金黄色葡萄球菌(2),白念珠菌(3),大肠埃希菌(4),普通变形第5期王芳,等:番石榴叶提取物的鉴定及其抗茵作用367杆菌(5)均有抑制作用,表明番石榴叶提取物中存在有效抗菌成分,其中以乙醇提取物中白念珠菌,氯仿提取物中大肠埃希菌高度敏感.3.2抑菌性能及其稳定性番石榴叶乙醇提取物在4～25时,金黄色葡萄球菌(2)和白念珠菌(3)抑菌效果受温度变化影响较小,4时抑菌效果最好,但随着温度的升高,稳定性下降,抑菌效果降低.白念珠菌(3)抑菌效果受温度变化影响较大.我们对番石榴叶化学成分进行了提取分离并希望得到单体化合物,并将进一步对各种化合物单体进行抗菌试验研究,以确定其抗菌作用有效成分