银耳深层发酵浸膏多糖抗氧化活性的研究

李艳秋 宋慧 苏玲 高坡 张洋
吉林农业大学生命科学学院,长春130118

文章摘要:对银耳液体深层发酵多糖浸膏进行乙醇分级，得到乙醇终浓度为35％，50％，65％的3个多糖组分，即TF1，TF2，TF3。对其抗氧化活性进行了比较研究，结果表明：TF3的抗氧化活性最强，对超氧阴离子的清除率为16．9％，对羟基自由基的清除率为23．6％。
文章主题:银耳多糖 抗氧化活性 超氧阴离子 羟基自由基

文章内容：第5卷第3期207年9月菌物研究01.5.3.207银耳深层发酵浸膏多糖抗氧化活性的研究李艳秋,宋慧,苏玲,高坡,张洋(吉林农业大学生命科学学院,长春130118)摘要:对银耳液体深层发酵多糖浸膏进行乙醇分级,得到乙醇终浓度为35%,50%,65%的3个多糖组分,即1,2,3.对其抗氧化活性进行了比较研究,结果表明:3的抗氧化活性最强,对超氧阴离子的清除率为16.9%,对羟基自由基的清除率为23.6%.关键词:银耳多糖;抗氧化活性;超氧阴离子;羟基自由基中图分类号:285.5文献标识码:文章编号:1672.3538(200")03.0174.02-—,,,,(,,130118,):1,2,3—35%,50%,65%.—3—,—16.9%23.6%.:.;;;食药用真菌多糖被称为"生物应答效应物"(,),是一种增强人体免疫功能的生物活性物质1.近年来关于真菌多糖生物活性的研究报道主要集中在免疫调节,抗肿瘤_2,抗衰老,抗溃疡,抗氧化等方面_3_3.刘培勋等对银耳碱提多糖抗氧化活性进行了研究_4;吴琼等对碱溶性银耳粗多糖的提取及其清除自由基作用进行了研究_5,而对银耳其他多糖的抗氧化活性的研究国内鲜有报道.在生命活动过程中氧化代谢反应产生的超氧阴离子自由基,羟基自由基和脂基自由基是3种具有代表性的自由基.当机体内自由基过剩时,会引起脂质过氧化,蛋白质变性,链断裂,细胞解体等,可诱发癌症,高血质症,急慢性炎症,糖尿病,衰老,辐射损伤等疾病_6_6.由于化学合成的抗氧化剂大多有毒副作用,因此从天然植物中寻找低毒或无毒的抗氧化有效成分意义重大.本试验选用银耳发酵浸膏为材料,经乙醇分级得到银耳多糖不同醇沉组分,采用邻苯三酚法和202/体系,比较它们对超氧阴离子和羟基自由基的清除能力,从中筛选抗氧化能力强的组分,为银耳多糖中抗氧化活性物质的进一步研究提供依据.基金项目:吉林省科技发展计划项日(20060924)作者简介:李艳秋(1983.),女,硕士研究生,主要从事真菌多糖方面研究.收稿日期:200608.1*通讯作者:宋慧,-:@163.第5卷第3期李艳秋等:银耳深层发酵浸膏多糖抗氧化活性的研究1材料与方法1.1试验材料与试剂,仪器试验用银耳液体深层发酵浸膏由白求恩医科大学制药厂提供.浓盐酸,邻苯三酚,三羟甲基氨基甲烷,乙二胺四乙酸,缓冲液,番红,2一2,22等试剂均为国产分析纯.试验仪器主要有6010型紫外可见分光光度计(上海安捷伦仪器分析公司),一2型酸度计(上海雷磁仪器有限公司),722分光光度计(上海精密科学仪器有限公司).1.2方法1.2.1银耳发酵浸膏水溶性多糖的制备取一定量的银耳液体深层发酵浸膏,用95%的乙醇浸泡以除去脂溶性物质.过夜后弃去上清液,在沉淀中加3倍体积的蒸馏水,80℃水浴提取多糖.提取液浓缩至1/5体积,加入95%乙醇,使乙醇终浓度达到35%后搅拌均匀,4'静置过夜.离心取沉淀,干燥后即得乙醇终浓度为35%的多糖组分(1).上清液中继续加入95%乙醇,按上述方法操作可得乙醇终浓度分别为50%,65%的多糖组分(2,3).1.2.2超氧阴离子的清除采用邻苯三酚法,在试验中用浓盐酸调节—1缓冲液的值,依次调为8.0,8.1,8.2,8.3,8.4.选取自氧化速率0为0.070(±0.001)/的值,以此值配制～1缓冲液,用6010型紫外可见分光光度计测定样品的自氧化速率,并计算清除率0一.1.2.3羟基自由基的清除采用22/法8,用722分光光度计测定光密度值,计算清除率.2结果与分析2.1邻苯三酚法值的选择在邻苯三酚试验中,自氧化速率随溶液值增大而增大,但对时间的线性相关逐渐变差.当回归线的斜率=0.070时为最佳,其值为8.2.因此选取值为8.2的缓冲体系,在6内对3个多糖组分的自氧化速率进行测定.2.2不同多糖组分对超氧阴离子和羟基自由基的清除效果用邻苯三酚法和22/体系对银耳深层发酵浸膏乙醇分级沉淀得到的3个多糖组分1,2和3的抗氧化能力进行测定的结果见图1.3,1,2多糖组分对超氧阴离子的清除率分别为16.9%,11.3%,2.9%,对羟基自由基的清除率分别为23.6%,6.17%,3.30%.试验结果表明银耳液体发酵浸膏多糖有一定的抗氧化作用.一童23多裙组分'母?图13种多糖组分的超氧阴离子清除率及羟基自由基清除率.1.?用乙醇沉淀多糖时,随着乙醇终浓度的升高,沉淀所得多糖的分子量逐渐变小[.3个多糖组分的分子量大小依次为1&;2&;3,不同分子量多糖抗氧化能力也不同.多糖的抗氧化活性与其中所含还原糖的结构和数量有关.乙醇终浓度为35%和65%时多糖组分的抗氧化活性要明显优于乙醇终浓度为50%的多糖.可能是因为1多为大分子量的多糖,其多糖的还原端数量较多,3多为小分子多糖,其寡糖和单糖数量较多,两者抗氧化能力较强,而2中多糖分子量居中,所含多糖的还原端数量和寡糖数量少于1和3,其抗氧化能力也相对较低.3小结1)本试验中1对超氧阴离子的清除能力较对羟基自由基的清除能力强;3对羟基自由基的清除能力高于对超氧阴离子的清除能力;2对羟基自由基和超氧阴离子的(下转第182页)加5蹬0罾霜一斟蜒182菌物研究27焦[].,2004,95:1181.1203.,.[]..22,106:1262-1276..:[].,2002,35(1):18.24.,.,:-[]..2003.29:629—640.,,.[].,22,297:357.,-,,1.[].,2001,19:349.355.,,.1,2,3--[].,2002,35:247-(上接第175页)清除能力相近.由此可以推测银耳发酵浸膏多糖对超氧阴离子和羟基自由基的清除率并无一一对应关系.但是由于缺少相关文献和实验数据的支持,此结论还有待于进一步研究证实.2)在邻苯三酚试验中,在确定缓冲液最佳值时,应做多个重复以保证选值的准确性,(缓冲液值误差不得大于±0.01).在测定样品时同样要做重复实验,以确保结果的准确性.'3)用邻苯三酚法对超氧