犬细小病毒灭活效力测定的新方法

Godd.,RD 韩宇

文章主题:鸡 犬细小病毒 疫苗 ELISA 测定

文章内容：犬细小病毒灭活苗效力测定的新方法1..等通常检铡疫苗效力的方法是将靶动物免疫后在适当时间进行攻毒试验.这种方珐会导致未免疫的对照动物或免疫不确实动物的惑染与死亡,从经济及实用观点来看巳越来越不受人们的欢迎.应用实验动物模型,间接地检测疫苗的免疫原性却成为一种趋势.例如,马流感及本文所述方珐,似乎更适台检测犬细小病毒灭活疫苗.(1982)发明了一种用鸡体来比较各疫苗效力的方法.给3周龄鸡注射供试疫苗,7天岳采血捡测其中和及血凝抑制抗体.本试验的目的是进一步验-的观点.为了检测更多的血清样本,我们采用了敏感且简单的法.材料与方法采用3周龄无特定病原的白来航鸡.由于试验疫苗为灭活苗,所以给不同疫苗或剂量的鸡只无需隔离,一次拄苗的鸡群可同台饲养.疫苗采用腿部肌肉注射,血样由臂静脉采取.疫苗:供试疫苗为3个广家的7个产品,共19个疫苗.其中,1个单价和1个多价苗是由同一批细小病毒生产的,其它17个苗是由不同批次的病毒生产的.每个厂家提供1个单价苗及1个含钩端螺旋体,肝炎的多价灭活苗.常规试验;将正常剂量疫苗进行倍比一42一稀释至64倍.每个剂量接种10只鸡.对其中3个未经稀释苗与其相应的稀释苗进行比较,'方法是将该3个苗用(7.2)稀释后各取0.进行接种,比较免疫后的1,2,3周的抗体水平.拴谢经4,16,64,3个稀释度亮疫接种晦供试鸡的抗体水平.本试验需只未免疫鸡做对照.犬细小焘毒由祷拉斯高大学兽医学院提供,在猫胚肺细胞上3℃螬殖天收获的组织培养液,0转离心15分钟,而后10,000转/分离心3分钟进行撼纯.病毒经100,009转/分离心6小时,浓缩后再加1/1原体积的(7.2)稀释.用超声波将病毒粉碎后,.作为抗原贮于一7℃备用.用96孔微量反应板作圃柜载俸.抗原用0.06的碳酸盐缓冲液.(.6)彀/稀释后,每孔加入50,4℃过夜.反应板用含有.05%20绗0.85盐水洗涤5次.血清用含有0.05%20的(7.2)做1/稀释后每孔加50,37℃感作1小时,如上洗涤5次,而后甩干.每孔加59的用—1/稀释的酶结台杨(硷性磷酸酶标记兔抗鸡),37℃癖作小时.5次洗涤后,每孔加底物5.底物的制备是将片104磷酸酶底物(5邻硝基酚磷酸盐)溶于51的二氮基乙醇,..氯化镁(9.8)冲.反应板37℃感作45分钟,而后用分光光度在渡长为410测定值.每板均应设阳性,阴性对照,所得数值均应与阳性对照比率(本次值,以前0值)相乘,以便使不同时期所测的值能直接比较.结果试验方法的标准化;未免疫的对照组始终呈阴性结果,对所有的供试疫苗均有明显的免疫应答.产生免疫应答的各稀释度与抗体的10值呈直线分布.最具代表性的稀释度为正常剂量的4,16和6.免疫后1周可产生较好的免疫应答,而抗体水平高峰出现在免疫3周以后.未稀释的疫苗要比经稀释疫苗产生较高的抗体,但差异不显着..为比较不同疫苗的效力,我们预狈了一个正常剂量的疫苗产生抗体的值(表).裹供试疫苗1个辩■产生的抗体值细小痨毒伽端螺麓体?肝炎岿毒试验的重复性.为检刮试验的重复性,我们选用了4个苗进行了重复试验,结果表明重复性较好.除16号苗(23%)外,其它苗的差异均在8—17%之间,而16号疫苗的免疫效果较差.单价苗与多价苗的比较;由于厂家的供试疫苗的数量较少,分析结果不可靠,所以排除在外.单价苗与多价苗之间括号内为重复试验结果存在着显着差异.厂家的多价苗的效力远不如单价苗(&;.5),厂家剐更是如此(&;0.1).17号多价苗与1号单价苗属同批生产的病毒,但其值仅是号苗的一半.为证实附加成分削弱细小病毒活性,我们进行了一次小试验.将试验鸡接种7号或14号疫苗或这2个苗加上相同荆量的一43一…一一—_『～同厂家生产的盱炎/钩端螺旋体灭活苗.结果同时接种其它苗的1个剂量的7号苗的值由2.04下降为1.30,同样14号苗的值由2.36下降为1.75(图1).将,家提供的单价苗4倍稀释接种,另与4倍稀释的同广家的钩端螺旋体苗同时按种,结果厂家的疫苗的0值分别为1.29和1.1】,厂家的疫苗的值分别为1.55和1.19讨论本试验进一步证实了提出的不同细小病毒灭活苗的抗原性可通过鸡体进行比较.11的试验方法亦可用于评价疫苗的灭活方法及佐剂对抗原性的影响.他的比较方法主要是基于中和试验,而应用法监测抗体,使得在短时间内能够检测大量样本.虽然未经稀释的疫苗能够产生较高的抗体应普,但稀释疫苗的效果也是令人满意的且其操做简单.试验结果表明注射多价疫苗可削弱鸡体对细小病毒成分的免疫应答.这似乎不仅仅与抗原成分不同有关,因为在7号苗和4号苗也存在着这种削弱现象.按种单价苗的试验组,亮疫鸡产生相应的抗体,而同时接种等量的钩端螺旋体,盱受疫苗的试验组,免疫鸡所产生的抗体则明显下降.厂家的细小病毒苗与钩端螺旋体苗同时接种,可使细小病毒苗的免疫力降低23.同样,厂家的疫苗试验结果降低14.从经济及实用的角度上看,目前的趋势是用少量的动物模型代替靶动物.但在本试验中鸡所产生的抗体水平与实际应用于狗所获得的免疫效果是否一致,特别是在附加抗原免疫抑制作用存在下,这一点还有待于进一步研究.目前,厂商当局及用户均对应用动物模型测定疫苗效力表现出极大的兴趣.本试验重复性好,无论从经济还是从实用角度上看均优于用狗.如果能证明本试验结果与狗体应用产生相同的免疫效果,那么本方法即可用于犬细小病毒疫苗的效力检测.即使结果不相一致,本试验亦可用于评价不同批次的疫苗,淘汰不合格产品.韩宇译自((..》,1990,126(2)497—49骆一凡校