拮抗菌株C8-8控病促生作用机制初探

刘邮洲 陈志谊 刘永峰 罗楚平
江苏省农业科学院植物保护研究所,南京210014

文章摘要:拮抗菌C8-8是本实验室从蔬菜根围分离获得的一株能分泌几丁质酶的广谱多效型菌株。盆栽试验结果表明，C8-8对茄果类蔬菜枯萎病（fusarium wilt）的防治效果达53．85％～75．61％，同时还能有效防治蔬菜晚疫病（late blight）和叶霉病（leaf mold）等真菌病害。盆栽促生试验结果显示，经C8-8处理的番茄苗株高和株鲜重分别比对照增加13．86％和12．00％，
文章主题:拮抗菌株C8-8 抗病性 促生

文章内容：中国生物防治2007年11月拮抗菌株8—8控病促生作用机制初探刘邮洲,陈志谊,刘永峰,罗楚平(江苏省农业科学院植物保护研究所,南京210014)8.8?,-,-,—(,,210014,)关键词:拮抗菌株8.8;抗病性;促生中图分类号:$436.412.12;$476文献标识码:文章编号:1005.9261(2007)04.0397.04拮抗菌8.8是本实验室从蔬菜根围分离获得的一株能分泌几丁质酶的广谱多效型菌株….盆栽试验结果表明,8.8对茄果类蔬菜枯萎病()的防治效果达53.85%～75.61%,同时还能有效防治蔬菜晚疫病(1)和叶霉病(1)等真菌病害.盆栽促生试验结果显示,经8.8处理的番茄苗株高和株鲜重分别比对照增加13.86%和12.00%,促生作用明显_.近年来,人们对植物抗病性反应与活性氧()之间的关系进行了较为深入的研究.越来越多的研究证明在植物防卫反应中具有重要的作用;22是植物体产生的最稳定的活性氧,在植物与病原菌的互作体系中可发挥不同的作用_23.过氧化氢酶()和抗坏血酸过氧化物酶()都是植物体内,02的主要清除酶.许多研究表明,和酶活性与植物抗病性有密切的关系_45.本试验以抗病性密切相关的4个酶:苯丙氨酸解氨酶(),过氧化物酶(),过氧化氢酶()和抗坏血酸过氧化物酶()作为植物抗病性反应的指标,对接种晚疫病菌和拮抗细菌8-8后,植物体内酶的活性水平进行比较研究,试图了解拮抗菌8-8对植物是否存在抗病性诱导作用.植物生长素赤霉素()和吲哚乙酸()是植物生长重要的调节物质,主要由植物产生.但近年来发现一些微生物,其中包括植物根际促生细菌也能产生植物生长激素_6.本文对拮抗菌8.8的促生作用是否与该菌株产生植物激素有关进行了研究.1材料与方法1.1菌种及培养基拮抗菌株8.8由本实验室从蔬菜根围分离获得.番茄晚疫病菌(.)由本实验室田间分离获得.晚疫病菌的培养,孢子囊与游动孢子的制备参照陆家云¨方法.基本培养基:(4)2041,247,2043,柠檬酸三钠0.5,04?7200.1,葡萄糖5,1000水,7.2;培养基.1.2试剂吲哚乙酸()和赤霉素()购自公司.本试验分析所用试剂均为收稿日期:2007.01.28基金项目:江苏省自然科学基金(2004172);江苏省农业科学院基金(6110620);国家863计划项目(200610211)作者简介:刘邮洲(1975一),女,博士生,.:88888@163.0.397中国生物防治第23卷色谱纯.1.3寄主植株(番茄)抗病性相关酶活性测定1.3.1番茄植株处理将番茄(品种为2037,由江苏省农科院蔬菜研究所提供)种子播种在温室盆钵内,待幼苗长出3片真叶后移栽,移栽后20备用.病原菌接种使用喷雾法,浓度为5×104孢子囊/.试验分接种晚疫病菌后喷施拮抗菌8—8,接种晚疫病菌和清水对照3个处理,每处理10株重复.接种晚疫病菌1后,均匀喷施8.8菌液,自然吹干.分别于处理后0,1,2,3,4,5和6取番茄叶片进行酶活性测定,取平均值.1.3.2酶的提取参照陈捷等_的方法:取各个处理的番茄叶片1.0,加入0.2/硼酸钠缓冲液2.0(8.8,内含5/巯基乙醇和1/),聚乙烯吡咯烷酮()0.1和少量石英砂在冰浴中研磨成匀浆,硼酸钠缓冲液3.0冲洗残留部分,转入离心管.搅动5后于4℃,12000/离心20,上清液即为和的粗酶液.参照华苟根_】的方法提取和粗酶液:取各个处理的番茄叶片1.0,剪碎后,加入0.05/磷酸缓冲液2.0(6.8,内含1/抗坏血酸和1/),0.1和少量石英砂,冰浴中研磨成匀浆,磷酸缓冲液3.0冲洗残留部分,转入离心管.搅动5后于4℃,12000/离心20,上清液即为和的粗酶液.1.3.3酶活性测定的测定以0.01/.苯丙氨酸为底物,在反应体系中加入酶液0.2,缓冲液2.8,0.01/-苯丙氨酸(用不含巯基乙醇的0.05/8.7的硼酸缓冲液配制)1,测定时对照不加酶液而加0.2缓冲液.反应体系于40℃恒温水浴60,立即加入16/11中止反应,测定290值,以每小时使290增加0.01所需酶量为一个酶活单位();的测定以0.18/愈疮木酚为底物,室温反应5,测定4砷值,以每分钟使46增加0.01所需酶量为一个酶活单位();的测定以0.2%2为底物,室温反应3,测定240值,以每分钟使24减少0.01所需酶量为一个酶活单位();的测定以15/抗坏血酸()和0.3/:2为底物,测定290值,以每分钟使290减少0.01所需酶量为一个酶活单位().1.4菌株8.8代谢产物中植物生长素的分析测定1.4.1条件11高效液相色谱仪(美国公司),色谱柱:.18,4.6×150.0,.,5;流动相:27.5%?72.5%2(用34调至4.0);检测波长:218;进样量:10;流速;0.7/.二极管矩阵检测器(1315.)检测.1.4.2代谢产物提取及测定将50培养基和50的基本培养基灭菌后分别接种活化的拮抗细菌8.8菌液1(浓度为10/1).于28℃,150/摇床振荡培养48,7000/离心沉淀菌体,上清液用0.22的膜过滤后,乙酸乙酯萃取3次.室温干燥后用10甲醇溶解,0.22膜过滤.吸取试样溶液10用高效液相色谱法()测定和的含量.重复进样3次,取各组分面积平均值.2结果与分析2.1和活性变化从图1可以看出,喷施清水后植株体内酶活无明显变化.喷施晚疫病菌后,植株体内酶活在2达到高峰,随后开始下降;处理6酶活值降为20.晚疫病菌处理后再喷施拮抗菌8-8,植株体内酶活在2达到最大值,3后植株体内398第4期刘邮洲等:拮抗菌株8—8控病促生作用机制初探酶活稳定,酶活值维持在35.喷施清水和晚疫病菌两个处理,植株体内的酶活变化曲线相似(图2).处理后1酶活增加,随后下降;3达到最高值,然后缓慢下降.晚疫病菌处理后再喷施拮抗菌8.8,植株体内酶活迅速增加,4酶活为120,随后开始下降.!丑0123456处理时间()己!000123456处理时间()图1拮抗菌8.