高效液相色谱法同时测定油脂中的九种抗氧化剂

文章内容：食茄理化齄验一1117片高效液相色谱同时测定油脂中的九种抗氧化剂梳氛,1删,,^胡小钟孙保国邵俊杰余建新广—～刚舀抗氧化剂是防止食品成分氧化变质的一类食品添加剂,通过给予食品中易氧化成分分子脱氢基团以氢原子,阻止氧化连锁反应或与其形成络合物,或抑制氧化酶类的活性,从而防止或延缓食品被氧化.各国使用的抗氧化剂总数约30种,我国常用于油脂的脂溶性抗氧剂有,,等,几种抗氧剂可单独使用,也可混合使用口].本文研究的九种酚类抗氧化剂是:没食子酸丙酯,2,4,5一三羟基苯丁酮,叔丁基对苯二酚,正二氢愈创酸,丁基羟基茴香醚,二叔丁基羟基甲苯,没食子酸辛酯,二丁基羟基甲苯,没食子酸十二酯,其英文缩写及登记号见表1,化学结构式见图1.这九种抗氧化剂均稍有毒性,但世界各国(地区)对其能否用于油脂作食品加剂的规定是不同的,因而出现了某种抗氧剂允许在某一个国家使用,而在另一个国家被禁用的情况,但各种抗氧剂的允许使用限量基本是一致的0],详情见表2.针对这种现象,有必要建立一种能同时测定九种抗氧化刺的简便方法,以适应进了口油脂检验的需要.酚类抗氧化剂的检测方法有薄层色谱法,比色法,气相色谱法,这些方法试样前处理手续繁琐,几种抗氧剂的分离也较困难,干扰因素多.文献-6]报道用高效液相色谱法检测酚类抗氧剂,但对于本文所研究的九种酚类抗氧剂的同时分离测定,尚未见报道.本文研究了九种酚类抗氧化剂的色谱保留行为,并运用微量化技术口和反相高效液相色谱技术,以梯度洗脱,外标法定量,建立了一种同时测定九种脂溶酚类抗氧剂的快速,简便的方法,可满足进出口商品检验工作中油脂检验的需要.表九种酚类扰氯化剂的英文缩写及登记号序号抗氧化剂中文名称英文缩写登记号没食子酸丙酯2_79-922,4,5-三羟基苯丁酮1421-63—23叔丁基对苯二酚948—3一04正二氢愈创酸500-38—95丁基羟基茴香醚25013—16—56二叔丁基羟基甲苯一100无7没食子酸辛酯()(;1034—01-18二丁基羟基甲苯128—37—09投食子酸十=酯(1)166—52—54期2第年9蛉口母食品理化检验1999年第2期,【【),,【'【0『8帅"忙州22ⅲ.(+'',,,图1九种酚类抗氧剂结构式:;::3:;:-100+:;;;表2世界各国(地区)允许在油指中使用的抗曩剂爰使用限量(/)序号抗氧剂美国加拿★欧盟中国日本韩国新加坡中国台湾0.20.2.1.10.10.10.10.12.2.23.2.24).2.10.150.20.20.2.2.2.26.100.10.17()0.10.180.20.2.20.20.2.20.2.29.1.1往:'禁上匕便用一,实验部分1.试剂乙腈,甲醇:色谱纯;正己烷,异丙醇:分析纯,重蒸;醋酸:分析纯;水:重蒸水.乙腈饱和正己烷,正己烷饱和乙腈:将乙腈与正己烷混摇2,使其相互饱和,静置,分层.在下述提取净化过程中均使用这种饱和溶剂.流动相:=1.5醋酸甲醇溶液;=1.5醋酸水溶液.抗氧化剂标准品:,00,,购自;,,购自;购自;购自天津进出口商品检验局.标准贮备液(1/1):分别称取九种抗氧化剂各50.0(精确至0.1),以异雨醇一乙腈(1+1)溶解,转至50容量瓶中,以异丙醇一乙腈(1+1)稀释至刻度,混匀,冷冻5食品理化检验1999年第2期避光保存.标准工作液:临用前以异丙醇一乙腈(1—1)稀释至适当浓度.2.仪器和设备提取器:25具塞玻璃离心管;液体混匀器:一51;离心机:6;旋转真空浓缩仪:.仪器:岛津-10型高效液相色谱仪;一10型紫外检测器;一6型积分仪.色谱柱:18(,250×4.6.).保护柱:一18(,40×4.6.).3.条件.柱温:4℃,检测波长:280进样量:20梯度洗脱曲线见图2.●4.分析步骤制样:取约50代表性样品于.1竺:100烧杯中置于6℃水洛中以洁醇//净玻棒充分混匀.扣/提取与净化:称取1.00试样于品/提取器中,放入5乙腈饱和正己..1/烷,在液体混匀器上振荡片刻以充分'卜——_,(_溶解油样,加入10正己烷饱和的————-——————_-—乙腈,于液体混匀器一快速混匀,以30/,离心3,将囝2梯疰洗脱盐线乙腈层转入5浓缩瓶内,正己烷层再以己腈提取两次,每次10,合并乙腈层于浓缩瓶内.浓缩与定容:合并的提取液在40"水浴中,以旋转真空浓缩至约左右,将浓缩液转至5刻度管中,并以少许异丙醇洗涤浓缩瓶,合并洗涤液于刻度管中,以异丙醇定容至2,经0.45滤膜过滤,立即以进行分析.二,结果与讨论1.净化方法的选择我们对表3所列三种净化方法进行了比较,所得结果无明显差异,本研究采用第三种方法(即微量化处理法),所用样品量,溶剂量较小,对环境和操作人员的危害较小,并且能满足提取,净化的要求,优于其它两种方法.表3三种不同净化方法的条件序号取样量()提取液净化方法参考文献5正己烷3×50乙脯分配4,52550.乙睛异丙醇_乙醇(2:1)一18℃玲冻1..过滤635正烷3×1乙脯分配76,食品理化检验1999年第2期2.流动相组成及流速选择文献4-]采用乙腈一甲酵一醋酸一水体系作流动相,考虑到乙腈作流动相毒性较大,且价格昂贵,我们选择甲酵一水醋酸体系为流动相.我们实验了含不同比例甲醇的流动相的分离效果,以研究流动相中甲醇含量对各组分保留时间的影响.图3是示的是不同甲酵含量时各组分之间的分离情况,从图中情况可以看出,随着流动相中甲醇含量减少,即流动相溶剂强度减弱,各组分保留时间变长,分离情况得到改善.实验还发现,随着流速的增加,各组分保留时间缩短,分离效果变差,流速暖收压.小日寸兰竺保留时间篓,谱峰形扩散加圉3流动相甲醇台量对分离效果的影响剧,本研究采用/的流速.醇一;:';5,(;.:):50,3.流动相酸度对分离的影响文献中流动相醋酸含量为5,实验发现在此条件下,色谱柱的柱效下降很快,各组分的分离情况变差,不适合于日常分析用我们实验于流动相中醋酸含量的变化对分离效果的影响,发现流动相含酸从.8降至时,各组分保留时间缩短,

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